Elektroforeza denaturująca i immunodetekcja białek techniką Western-Blot

1. samodzielne przygotowanie żeli poliakrylamidowych;
2. ekstrakcja białek błonowych i rozpuszczalnych z materiału biologicznego wraz z oznaczeniem zawartości białek w otrzymanych ekstraktach metodami spektrofotometrycznymi;
3. denaturacja prób;
4. rozdział elektroforetyczny ekstraktów białkowych;
5. detekcja białek metodami kolorymetrycznymi;
6. transfer mokrego białka na membrany oraz immunodetekcja i wizualizacja wybranych białek metodą Western-Blot;
7. analiza ilościowa otrzymanych wyników.

Biorad Mini-PROTEAN Gel Electrophoresis System, Biorad Mini Trans-Blot® Cell. Biorad Chemidoc MP Imaging System, Shimadzu UV-1900i UV-Vis Spectrophotometer, drobny sprzęt laboratoryjny (blok grzewczy, pipety automatyczne, mieszadła magnetyczne), oprogramowanie open-source ImageJ oraz BioRad Image Lab.

1. samodzielne przygotowanie żeli poliakrylamidowych;
2. ekstrakcja białek błonowych i rozpuszczalnych z materiału biologicznego;
3. oznaczanie zawartości białek w otrzymanych ekstraktach metodami spektrofotometrycznymi;
4. denaturacja prób;
5. rozdział elektroforetyczny ekstraktów białkowych;
6. detekcja białek metodami kolorymetrycznymi;
7. transfer mokry białek na membrany;
8. immunodetekcja i wizualizacja wybranych białek metodą Western-Blot;
9. analiza ilościowa otrzymanych wyników.

Po ukończeniu zajęć uczestnik będzie:

1. potrafił przeprowadzić procedurę elektroforetycznego rozdziału białek otrzymanych samodzielnie z materiału biologicznego;
2. potrafił zwizualizować białka rozdzielone elektroforetycznie;
3. potrafił przeprowadzić immunodetekcję wybranego białka i zwizualizować efekt przeprowadzonej procedury;
4. potrafił jakościowo i ilościowo zanalizować otrzymane wyniki.

Kurs przeznaczony dla pracowników jednostek naukowych, nauczycieli lub edukatorów, doktorantów, studentów