Metody oczyszczania i podstawy analizy białek rekombinowanych

1. praktyczne opanowanie chromatografii powinowactwa do jonów metali, sączenia molekularnego, elektroforezy denaturującej białek, analizy Western Blot i oznaczania ilości białka w preparacie;
2. zrozumienie podstaw teoretycznych prezentowanych metod;
3. umiejętność zaplanowania analiz pozwalających ocenić jakość preparatu białkowego;
4. zdobycie wiedzy pozwalającej na dobór optymalnej metody wizualizacji białek po rozdziale elektroforetycznym w zależności od potrzeb;
5. umiejętność interpretacji wyników elektroforezy denaturującej białek i analizy Western Blot oraz integracji informacji uzyskiwanych z różnych analiz.

wirówki z chłodzeniem, aparaty do elektroforezy SDS-PAGE, aparaty do elektrotransferu mokrego i półsuchego, spektrofotometr Nanodrop One, Chemidoc oraz drobny sprzęt laboratoryjny.

1. oczyszczenie rekombinowanego białka enzymatycznego metodą chromatografii powinowactwa do jonów metali;
2. wykonanie sączenia molekularnego (próby niebiałkowe);
3. oznaczanie zawartości i aktywności enzymatycznej białka w próbach uzyskanych podczas oczyszczania (pomiary spektrofotometryczne);
4. przygotowanie żeli poliakrylamidowych do elektroforezy denaturującej;
5. rozdział elektroforetyczny prób uzyskanych podczas chromatografii powinowactwa;
6. wizualizacja rozdzielonych białek;
7. elektrotransfer białek na membrany;
8. immunoidentyfikacja oczyszczanego białka metodą Western Blot.

Po ukończeniu zajęć uczestnik będzie:

1. umiał oczyścić rekombinowane białko metodą chromatografii powinowactwa do jonów metali oraz wykonać sączenie molekularne;
2. potrafił oznaczyć stężenie białka i jego aktywność enzymatyczną;
3. umiał wykonać elektroforetyczny rozdział białek w warunkach denaturujących i przeprowadzić barwienie rozdzielonych białek;
4. umiał przeprowadzić identyfikację białka metodą Western Blot;
5. potrafił ocenić jakość preparatu białka na podstawie interpretacji wyników poznanych analiz.

Kurs przeznaczony dla: pracowników jednostek naukowych, doktorantów,studentów, pracowników firm biotechnologicznych/farmaceutycznych, a także nauczycieli i edukatorów